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北京快3非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步

发布时间 2020-09-04 08:09

  

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  1)丙烯5261酰胺单体贮液:14.55g丙烯酰胺加4102上0.45g N,N-甲叉双丙烯酰胺,1653先用40mL双蒸水搅拌溶解,直到溶液变成透明,再用双蒸水稀至50mL,过滤。用棕色瓶4°C保存备用。

  4)10%(AP)过硫酸铵:0.1g过硫酸铵溶入1.0mL双蒸水,使用前新鲜配制。

  将玻璃板、胶垫、梳子用双蒸水洗干净,用酒精棉球擦拭,将电泳槽安装好,配制分离胶(12%)和浓缩胶(5%)如表1。过硫酸铵和TEMED最后加入,加入后聚合即开始,应立即混匀倒入两块玻璃板之间。分离胶倒入两块玻璃板间,应该留下适合的高度,使点样孔前端离分离胶有2.5cm左右的距离,在胶顶部缓缓加入约0.5cm高的双蒸水,待分离胶聚合完全后,倾去上层的双蒸水,用双蒸水清洗凝胶顶层,用吸水纸吸去残余的水滴。将浓缩胶倒入玻璃板夹层,插上梳子,待浓缩胶聚合完全后,拔去梳子,立即用双蒸水清洗点样孔。加入电极缓冲液,将样品用微量进样器点入点样孔底部,200伏电泳。当溴酚蓝到达分离胶时,电压改为250伏,继续电泳至溴酚蓝到达凝胶底部。将凝胶剥下,浸泡在100ml的底物液中,染色1小时,待胶带显色后立即照相。然后将凝胶进行常规的考马斯亮蓝染色。

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