服务热线
当前位置:主页 > 新闻中心 >

澳门赌场电泳还原与非还原区别

发布时间 2020-07-30 13:41

  

  2019-12-05知道答主回答量:7采纳率:0%帮助的人:1332关注

  聚丙烯2113酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛5261效应,它有两种形式:4102非变性电泳(1653Native-PAGE)和变性电泳(SDS-PAGE)。非变性电泳,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开;而变性电泳(SDS-PAGE)仅根据蛋白质亚基分子量的不同分开蛋白质(可以忽略电荷因素)。SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。

  强还原剂,如巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。有些蛋白含有二聚体或多聚体,如果加入β-巯基乙醇,它会还原多聚蛋白之间和内部的二硫键,这样,电泳的样品将会被完全还原成单体甚至亚基形式,不加还原剂的样品则会保持聚体的形式。

  SDS-PAGE有非还原SDS-PAGE和还原SDS-PAGE之分,均是变性条件下的电泳。非还原与还原的区别是在样品处理时是否加入还原剂(如β-巯基乙醇或DTT等)。

  在进行电泳方法选择时,首先要明确目标蛋白的结构特点,以及电泳目的预期,来决定是否需加入还原剂。

  如需测定目标蛋白的纯度及分子量,且目标蛋白为单体结构,二聚体、多聚体以及降解物均为其杂质成分,则一般采用非还原SDS-PAGE:采用该电泳方法,二聚体、多聚体在凝胶中的位置会处于单体分子量2倍或多倍的位置,利于观察及各组分的定性定量分析。

  如果仅需测定蛋白质亚基结构的分子量,则需采用还原SDS-PAGE,将二聚体、多聚体降解为单体,甚至降解为更低级的亚基结构(如抗体的重链和轻链)。理想情况下,若还原充分,仅可见亚基条带。

  2018-07-04蛋白质2113变性(denaturation):生物大分子的天然构象遭到5261破坏导致其生物活性丧失4102的现象。我以1653SDS-PAGE电泳为例试着说明你的问题: SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。 非变性凝胶里面没加变性剂。非变性胶跑出来的蛋白能保持其活性一般用做功能试验,如EMSA。由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都电荷的影响,因此对蛋白等电点的确定和缓冲液的酸碱性有注意,有时需要倒转电泳时的正负极。从跑的胶来看,变性胶会比较好看,带比较窄,非变性胶跑出来则比较粗糙。qsmm

  2018-07-04知道顶级答主回答量:26.2万采纳率:90%帮助的人:7.3亿关注SDS-PAGE有非还原2113性(non-reduced)SDS-PAGE和还原性(reduced)SDS-PAGE之分,均5261是变性条件下的电泳。还原与非4102还原的区别是1653在样品处理时加或不加还原剂(如DTT或2-巯基乙醇等)。已赞过已踩过你对这个回答的评价是?评论收起潮令田洁静

澳门赌场沓码-官网在线

联系人:李经理 座机:0371-64234539 地址:河南省焦作市巩义市夹津口工业园
微信二维码